ჰემოგლობინის ელექტროფორეზის ექსპერიმენტი

ექსპერიმენტის პრინციპი

ჰემოგლობინის ელექტროფორეზი მიზნად ისახავს სხვადასხვა ნორმალური და პათოლოგიური ჰემოგლობინის აღმოჩენას და დადასტურებას.

სხვადასხვა ტიპის ჰემოგლობინის სხვადასხვა მუხტისა და იზოელექტრული წერტილების გამო, გარკვეულ pH ბუფერულ ხსნარში, როდესაც ჰემოგლობინის იზოელექტრული წერტილი ბუფერული ხსნარის pH-ზე დაბალია, ჰემოგლობინი ატარებს უარყოფით მუხტს და ელექტროფორეზის დროს მიგრირებს ანოდისკენ. პირიქით, ჰემოგლობინი დადებითი მუხტით მოძრაობს კათოდისკენ.

გარკვეული ძაბვის ქვეშ და კონკრეტული ელექტროფორეზის დროის შემდეგ, ჰემოგლობინები სხვადასხვა მუხტითა და მოლეკულური წონით აჩვენებენ სხვადასხვა მიგრაციის მიმართულებებს და სიჩქარეს. ეს საშუალებას იძლევა განცალკევდეს ცალკეული ზონები და შემდგომი კოლორიმეტრიული ან ელექტროფორეზული სკანირების ანალიზი შეიძლება ჩატარდეს ამ ზონებზე სხვადასხვა ჰემოგლობინის რაოდენობრივი დასადგენად. ყველაზე ხშირად გამოყენებული მეთოდია pH 8.6 ცელულოზის აცეტატის მემბრანის ელექტროფორეზი.

ციტოპლაზმის შიგნით, ეთილენგლიკოლის ჯგუფები (CHOH-CHOH), რომლებიც გვხვდება გლიკოგენში ან პოლისაქარიდულ ნივთიერებებში (როგორიცაა მუკოპოლისაქარიდები, მუკოპროტეინები, გლიკოპროტეინები, გლიკოლიპიდები და ა.შ.) იჟანგება პერიოდული მჟავით და გარდაიქმნება ალდეჰიდის ჯგუფებად (CHO-CHO). ეს ალდეჰიდის ჯგუფები ერწყმის უფერო მეწამულ-წითელ შიფის რეაგენტს და ქმნიან მეწამულ-წითელ საღებავს, რომელიც დეპონირდება უჯრედში პოლისაქარიდების არსებობის ადგილებში. ეს რეაქცია ცნობილია როგორც პერიოდული მჟავა-შიფის (PAS) შეღებვა, რომელსაც ადრე გლიკოგენის შეღებვას ეძახდნენ.

ექსპერიმენტის მეთოდი

მასალები:ცელულოზის აცეტატიმემბრანი, ელექტროფორეზის აპარატი(DYCP-38C და კვების წყარო DYY-6C), უმაღლესი ნიმუშის ჩატვირთვის ინსტრუმენტი (პიპეტი), სპექტროფოტომეტრი, კოლორიმეტრული კუვეტები, ბუფერები.

ბუფერი:

(1) pH 8,6 TEB ბუფერი: აწონეთ 10,29 გ ტრისი, 0,6 გ EDTA, 3,2 გ ბორის მჟავა და დაამატეთ გამოხდილი წყალი 1000 მლ-მდე.

(2) ბორატის ბუფერი: აწონეთ 6,87 გ ბორაქსი და 5,56 გ ბორის მჟავა და დაამატეთ გამოხდილი წყალი 1000 მლ-მდე.

პროცედურა:

Pჰემოგლობინის ხსნარის რეპარაცია

მიიღეთ 3 მლ ჰეპარინის ან ნატრიუმის ციტრატის შემცველი სისხლი, როგორც ანტიკოაგულანტი. ცენტრიფუგა 2000 rpm-ზე 10 წუთის განმავლობაში და გადააგდეთ პლაზმა. გარეცხეთ სისხლის წითელი უჯრედები სამჯერ ფიზიოლოგიური ხსნარით (750 rpm, ყოველ ჯერზე 5 წუთი ცენტრიფუგაცია). ცენტრიფუგა 2200 rpm-ზე 10 წუთის განმავლობაში და გადააგდეთ ზენატანი. დაამატეთ თანაბარი რაოდენობით გამოხდილი წყალი, შემდეგ დაამატეთ ნახშირბადის ტეტრაქლორიდის მოცულობა 0,5-ჯერ. შეანჯღრიეთ ენერგიულად 5 წუთის განმავლობაში და შემდეგ ცენტრიფუგა 2200 rpm-ზე 10 წუთის განმავლობაში, რათა შეაგროვოს ზედა Hb ხსნარი შემდგომი გამოყენებისთვის.

მემბრანის გაჟღენთვა

ცელულოზის აცეტატის მემბრანა დავჭრათ 3 სმ × 8 სმ ზომის ზოლებად. დაასველეთ ისინი pH 8.6 TEB ბუფერში სრულ გაჯერებამდე, შემდეგ ამოიღეთ და გააშრეთ ფილტრის ქაღალდით.

Spotting

გამოიყენეთ პიპეტი, რათა დააფიქსიროთ 10 μl ჰემოგლობინის ხსნარი ვერტიკალურად ცელულოზის აცეტატის მემბრანაზე (უხეში მხარე), კიდედან დაახლოებით 1,5 სმ.

ელექტროფორეზი

ჩაასხით ბორატი ბუფერული ხსნარი ელექტროფორეზის კამერაში. მოათავსეთ ცელულოზის აცეტატის მემბრანა ლაქებით კამერის კათოდის ბოლოს. იმუშავეთ 200 ვოლტზე 30 წუთის განმავლობაში.

ელუცია

ამოჭერით HbA და HbA2 ზონები, მოათავსეთ ცალკე სინჯარებში და დაამატეთ შესაბამისად 15 მლ და 3 მლ გამოხდილი წყალი. ნაზად შეანჯღრიეთ ჰემოგლობინის სრულად გამორეცხვის მიზნით, შემდეგ აურიეთ.

კოლორიმეტრია

გამოხდის ხსნარისთვის გამოხდილი წყლის გამოყენებით ნულდება შთანთქმა და გაზომეთ შთანთქმა 415 ნმ.

გაანგარიშება

HbA2(%) = HbA2 მილის აბსორბცია / (HbA ტუბის აბსორბცია × 5 + HbA2 მილის აბსორბცია) × 100%

ექსპერიმენტული შედეგების გაანგარიშება

საცნობარო დიაპაზონი pH 8,6 TEB ბუფერული ცელულოზის აცეტატის ელექტროფორეზისთვის: HbA > 95%, HbA2 1%-3,1%

შენიშვნები

ელექტროფორეზის დრო არ უნდა იყოს ძალიან დიდი. ელექტროფორეზის დროს ცელულოზის აცეტატის მემბრანა არ უნდა გაშრეს. შეაჩერე ელექტროფორეზი, როდესაც HbA და HbA2 აშკარად განცალკევებულია. გახანგრძლივებულმა ელექტროფორეზმა შეიძლება გამოიწვიოს ზოლის დიფუზია და დაბინდვა.

მოერიდეთ ძალიან ბევრი ნიმუშის გამოყენებას. ჰემოგლობინის გადაჭარბებულმა სითხემ შეიძლება გამოიწვიოს ზოლების მოწყვეტა ან არასაკმარისი შეღებვა, რაც იწვევს HbA-ს ცრუ მომატებულ დონეს.

თავიდან აიცილოთ ცელულოზის აცეტატის მემბრანის ცილებით დაბინძურება.

დენი არ უნდა იყოს ძალიან მაღალი; წინააღმდეგ შემთხვევაში, ჰემოგლობინის ზოლები შეიძლება არ გაიყოს.

ყოველთვის შეიტანეთ ნიმუშები ნორმალური ადამიანებისგან და აუცილებელი ცნობილი პათოლოგიური ჰემოგლობინი, როგორც კონტროლი.

Beijing Liuyi Biotechnology აწარმოებს პროფესიონალურ ელექტროფორეზის ავზს ჰემოგლობინის ელექტროფორეზისთვის, რომელიც არის მოდელიDYCP-38Cცელულოზის აცეტატის მემბრანის ელექტროფორეზის ავზი და ელექტროფორეზის ელექტროფორეზის ორი მოდელი ხელმისაწვდომია ცელულოზის აცეტატის მემბრანის ელექტროფორეზის ავზისთვისDYY-2CდაDYY-6Cელექტრომომარაგება.

იმავდროულად, Beijing Liuyi Biotechnology უზრუნველყოფს ცელულოზის აცეტატის მემბრანას მომხმარებლებისთვის, ხოლო ცელულოზის აცეტატის მემბრანის ზომა შეიძლება მორგებული იყოს. კეთილი იყოს თქვენი მობრძანება მოგვთხოვოთ ნიმუშები და მეტი ინფორმაცია.

Beijing Liuyi ბრენდს ჩინეთში 50 წელზე მეტი ხნის ისტორია აქვს და კომპანიას შეუძლია უზრუნველყოს სტაბილური და მაღალი ხარისხის პროდუქცია მთელ მსოფლიოში. განვითარების წლების განმავლობაში, ის თქვენი არჩევანის ღირსია!

ჩვენ ახლა ვეძებთ პარტნიორებს, მივესალმებით როგორც OEM ელექტროფორეზის ავზს, ასევე დისტრიბუტორებს.

თუ თქვენ გაქვთ რაიმე შეძენის გეგმა ჩვენი პროდუქციისთვის, გთხოვთ, ნუ მოგერიდებათ დაგვიკავშირდეთ. შეგიძლიათ გამოგვიგზავნოთ შეტყობინება ელექტრონული ფოსტით[ელფოსტა დაცულია]ან[ელფოსტა დაცულია], ან გთხოვთ დაგვიკავშირდეთ +86 15810650221 ან დაამატეთ Whatsapp +86 15810650221, ან Wechat: 15810650221