გელის ელექტროფორეზის ოპტიმიზაცია: საუკეთესო პრაქტიკა ნიმუშის მოცულობის, ძაბვისა და დროისთვის

შესავალი

გელის ელექტროფორეზი არის ფუნდამენტური ტექნიკა მოლეკულურ ბიოლოგიაში, რომელიც ფართოდ გამოიყენება ცილების, ნუკლეინის მჟავების და სხვა მაკრომოლეკულების გამოყოფისთვის. ნიმუშის მოცულობის, ძაბვისა და ელექტროფორეზის დროის სათანადო კონტროლი გადამწყვეტია ზუსტი და გამეორებადი შედეგების მისაღწევად.ჩვენი ლაბორატორიის კოლეგა გთავაზობთსაუკეთესო პრაქტიკა ამ პარამეტრების მართვისთვის SDS-PAGE გელის ელექტროფორეზის დროს.

Beijing Liuyi Biotechnology ლარი ელექტროფორეზის პროდუქტები

ნიმუშის მოცულობა: თანმიმდევრულობის უზრუნველყოფა

SDS-PAGE ელექტროფორეზის ჩატარებისას, ნიმუშის მოცულობა არის ძირითადი ფაქტორი, რომელსაც შეუძლია მნიშვნელოვნად იმოქმედოს თქვენი შედეგების გარჩევადობაზე. ზოგადად რეკომენდებულია 10 μL მთლიანი ცილის ჩატვირთვა თითო ჭაბურღილში. თანმიმდევრულობის უზრუნველსაყოფად და მიმდებარე ჭაბურღილებს შორის ნიმუშის დიფუზიის თავიდან ასაცილებლად, მნიშვნელოვანია 1x დატვირთვის ბუფერის თანაბარი მოცულობის ჩატვირთვა ნებისმიერ ცარიელ ჭაბურღილში. ეს სიფრთხილის ზომა ხელს უწყობს ნიმუშების მეზობელ ზოლში გავრცელების თავიდან აცილებას, რაც შეიძლება მოხდეს ჭაბურღილის ცარიელი დატოვების შემთხვევაში.

ნიმუშების ჩატვირთვამდე ყოველთვის დაიწყეთ ერთ ჭაბურღილზე მოლეკულური წონის მარკერის დამატებით. ეს საშუალებას იძლევა ადვილად იდენტიფიცირდეს ცილის ზომები ელექტროფორეზის შემდეგ.

ძაბვის კონტროლი: დაბალანსების სიჩქარე და გარჩევადობა

ელექტროფორეზის დროს გამოყენებული ძაბვა პირდაპირ ზემოქმედებს როგორც სიჩქარეზე, რომლითაც ნიმუშები გადაადგილდებიან გელის მეშვეობით, ასევე გამოყოფის გარჩევადობაზე. SDS-PAGE-სთვის მიზანშეწონილია დაიწყოთ დაბალი ძაბვით დაახლოებით 80 ვ. ეს საწყისი დაბალი ძაბვა საშუალებას აძლევს ნიმუშებს მიგრაცია ნელა და თანაბრად, კონცენტრირდეს მათ მკვეთრ ზოლში, როდესაც ისინი შედიან გამყოფ გელში.

მას შემდეგ, რაც ნიმუშები სრულად შევა გამყოფ გელში, ძაბვა შეიძლება გაიზარდოს 120 ვ-მდე. ეს უფრო მაღალი ძაბვა აჩქარებს მიგრაციას, რაც უზრუნველყოფს ცილების ეფექტურად გამიჯვნას მათი მოლეკულური წონის მიხედვით. აუცილებელია ბრომფენოლის ლურჯი საღებავის ფრონტის პროგრესის მონიტორინგი, რაც მიუთითებს ელექტროფორეზის დასრულებაზე. 10-12% კონცენტრაციის გელებისთვის, როგორც წესი, საკმარისია 80-90 წუთი; თუმცა, 15% გელის შემთხვევაში, შეიძლება დაგჭირდეთ მუშაობის დროის ოდნავ გახანგრძლივება.

დროის მენეჯმენტი: იცოდეთ როდის უნდა გაჩერდეთ

დრო გელის ელექტროფორეზის კიდევ ერთი კრიტიკული ფაქტორია. გელის ზედმეტად ხანგრძლივ ან ძალიან ხანმოკლე გამოყენებამ შეიძლება გამოიწვიოს არაოპტიმალური განცალკევება. ბრომფენოლის ლურჯი საღებავის მიგრაცია სასარგებლო მაჩვენებელია: როდესაც ის მიაღწევს გელის ფსკერს, ჩვეულებრივ დროა შეჩერდეს სირბილი. სტანდარტული გელებისთვის, როგორიცაა 10-12%, ელექტროფორეზის ხანგრძლივობა დაახლოებით 80-90 წუთი, როგორც წესი, ადეკვატურია. უფრო მაღალი პროცენტული გელების შემთხვევაში, როგორიცაა 15%, მუშაობის დრო უნდა გაიზარდოს ცილების სრული გამოყოფის უზრუნველსაყოფად.

ბუფერის მართვა: ბუფერების ხელახალი გამოყენება და მომზადება

ელექტროფორეზის ბუფერის გამოყენება შესაძლებელია 1-2 ჯერ, თქვენი ლაბორატორიის სპეციფიკური პირობებიდან გამომდინარე. თუმცა, ოპტიმალური შედეგისთვის რეკომენდებულია ახალი 10x ბუფერის მომზადება და გამოყენებამდე მისი განზავება. ეს უზრუნველყოფს ბუფერის ეფექტურობის შენარჩუნებას, რაც იწვევს ელექტროფორეზის უფრო საიმედო შედეგებს.

Beijing Liuyi Biotechnology ლარი ელექტროფორეზის პროდუქტები

ნიმუშის მოცულობის, ძაბვისა და ელექტროფორეზის დროის ფრთხილად კონტროლით, შეგიძლიათ მნიშვნელოვნად გააუმჯობესოთ თქვენი გელის ელექტროფორეზის შედეგების სიზუსტე და გამეორება. ამ საუკეთესო პრაქტიკის დანერგვა თქვენს ლაბორატორიულ მუშაობაში დაგეხმარებათ მიაღწიოთ უფრო მკაფიო და მკაფიო ზოლებს, რაც გამოიწვევს უკეთეს მონაცემებს ქვედა დინების ანალიზისთვის.

თუ თქვენ გაქვთ მეტი კარგი მეთოდი გელის ელექტროფორეზის ექსპერიმენტის ოპტიმიზაციისთვის, კეთილი იყოს თქვენი მობრძანება ჩვენთან ერთად!

შპს Beijing Liuyi Biotechnology Co. (Liuyi Biotechnology) სპეციალიზირებულია ელექტროფორეზის ინსტრუმენტების წარმოებაში 50 წელზე მეტი ხნის განმავლობაში ჩვენი საკუთარი პროფესიული ტექნიკური გუნდისა და R&D ცენტრით. ჩვენ გვაქვს საიმედო და სრული საწარმოო ხაზი დიზაინიდან შემოწმებამდე და საწყობი, ასევე მარკეტინგული მხარდაჭერა. ჩვენი ძირითადი პროდუქტებია ელექტროფორეზის უჯრედი (ტანკი/კამერა), ელექტროფორეზის კვების წყარო, ლურჯი LED ტრანსილუმინატორი, ულტრაიისფერი ტრანსლიმინატორი, ლარი გამოსახულების და ანალიზის სისტემა და ა.შ.

თუ თქვენ გაქვთ რაიმე შეძენის გეგმა ჩვენი პროდუქციისთვის, გთხოვთ, ნუ მოგერიდებათ დაგვიკავშირდეთ. შეგიძლიათ გამოგვიგზავნოთ შეტყობინება ელექტრონული ფოსტით[ელფოსტა დაცულია]ან[ელფოსტა დაცულია], ან გთხოვთ დაგვიკავშირდეთ +86 15810650221 ან დაამატეთ Whatsapp +86 15810650221, ან Wechat: 15810650221.

გთხოვთ, დაასკანიროთ QR კოდი Whatsapp-ზე ან WeChat-ზე დასამატებლად.