შრატის ცილის გამოყოფის ექსპერიმენტი ცელულოზის აცეტატის მემბრანული ელექტროფორეზით

პრინციპი

ცელულოზის აცეტატის ფირის ელექტროფორეზი არის ელექტროფორეზის მეთოდი, რომელიც იყენებს ცელულოზის აცეტატის ფირის მხარდაჭერას.ფენომენს, რომლის დროსაც დამუხტული ნაწილაკები ელექტრული ველის მოქმედებით მოძრაობენ საპირისპირო ელექტროდისკენ, ელექტროფორეზი ეწოდება.ვინაიდან თითოეულ ცილას აქვს სპეციფიკური იზოელექტრული წერტილი, თუ ცილა მოთავსებულია ხსნარში, რომლის pH უფრო დაბალია, ვიდრე მისი იზოელექტრული წერტილი, ცილა დადებითად დამუხტული იქნება და გადავა უარყოფითი ელექტროდისკენ.პირიქით, დადებით პოლუსზე გადადის.იმის გამო, რომ ცილის მოლეკულების სიჩქარე ელექტრულ ველში მოძრაობს, დაკავშირებულია მათ მუხტთან, მოლეკულების ფორმასთან და ზომასთან, სხვადასხვა ცილების გამოყოფა შესაძლებელია ელექტროფორეზით.შრატი შეიცავს სხვადასხვა ცილებს, რომელთაგან ყველა იზოელექტრული წერტილებია pH 7,5 ან ნაკლები.როდესაც შრატი მოთავსებულია pH 8.6 ბუფერში ელექტროფორეზის გასატარებლად, შრატის ყველა ცილა უარყოფითად არის დამუხტული და ელექტრული ველის დადებითი მხარისკენ გადაინაცვლებს.ვინაიდან შრატის სხვადასხვა პროტეინს განსხვავებული მუხტი აქვს იმავე pH-ზე, მოლეკულური ნაწილაკები განსხვავებულია ზომით და, შესაბამისად, განსხვავებულია მიგრაციის სიჩქარე და ისინი გამოყოფილია ელექტროფორეზით.შრატის ცილების იზოელექტრული წერტილები და მოლეკულური წონა ნაჩვენებია ქვემოთ მოცემულ ცხრილში:

ექსპერიმენტი არის სისხლის შრატში სხვადასხვა ცილების გამოყოფა ცელულოზის აცეტატის მემბრანით (შემოკლ. CAM), როგორც დამხმარე საშუალება.CAM არის ერთგვარი ქაფიანი ლოსიeფილმი კარგი უნიფორმით და სისქე 0.1მმ-1.5მმ, რომელსაც აქვს გარკვეული წყლის შთანთქმა.

მასალები, ინსტრუმენტები და რეაგენტები CAM ელექტროფორეზისთვის

ნიმუშები:ჯანსაღი ადამიანის სისხლის შრატი

ინსტრუმენტი:კვების წყარო DYY-6C, ელექტროფორეზის ავზი DYCP-38C, უმაღლესი ნიმუშის დატვირთვა WD-9404

რეაგენტები

1)ცელულოზის აცეტატის მემბრანა 7X9სმ

2) PH 8.6 ბარბიტოლის ბუფერული ხსნარი (იონური სიძლიერე 0.05-0.09, ეს არის 0.06 დრო.): აიღეთ 1,84 გ დიეთილ ბარბიტური მჟავა და შემდეგ აიღეთ 1.03 გ დიეთილის ნატრიუმის პენტობარბიტალი, დაამატეთ ცოტა გამოხდილი წყალი გაცხელებამდე, რომ გაიხსნას და მოადუღეთ. 1000 მლ-მდე;

3) ლაქა: Ponceau S 0,2გრ, ტრიქლოროაცეტა 3გ, დაამატეთ 100მლ გამოხდილი წყალი;

4) TBS/T ან PBS/T: 45 მლ 95% ეთანოლი, 5 მლ გამყინვარებული ძმარმჟავა, დაამატეთ 50 მლ გამოხდილი წყალი;

5) გამწმენდი ხსნარი: 70 მლ უწყლო ეთანოლი, 30 მლ გამყინვარების ძმარმჟავა.

ექსპერიმენტის მეთოდიd

1) მემბრანის მომზადება: მემბრანა ჩაყარეთ ბარბიტოლის ბუფერულ ხსნარში 30 წთ-8 სთ და ამოიღეთ, ამოიღეთ დამატებითი ხსნარი შთამნთქმელი ქაღალდით.

2) ნიმუშების ჩატვირთვა: განასხვავეთ მემბრანის უხეში მხარე და გლუვი მხარე და მონიშნეთ ხაზი 1,5 სმ მანძილზე ზედა ბოლომდე უხეშ მხარეს.ჩატვირთეთ ნიმუშები ნიმუშების ჩატვირთვის უმაღლესი ხელსაწყოთი უხეშ მხარეს.შენიშვნა: ნიმუშები უნდა დაიტვირთოს მემბრანის უხეშ მხარეს.შრატის ნიმუშების მემბრანაში სრულად შეღწევის შემდეგ, გადააბრუნეთ მემბრანა, დაადეთ უხეში მხარე (ნიმუშებით) ავზისკენ და ნიმუშებით ბოლო მოთავსებულია უარყოფით ელექტროდში.

3) ელექტროფორეზი: ჩართეთ კვების წყარო, 0.4～0.6მ A/cm გარსი, მუშაობის დრო 30-45 წთ.ელექტროფორეზის გაშვების შემდეგ გამორთეთ დენი.

4) შეღებვა და გაწმენდა: ამოიღეთ გარსი ავზიდან და ჩაეფლოit შეიტანეთ საღებავის ხსნარში 5 წუთის განმავლობაში და შემდეგ გაწმინდეთ იგი გამწმენდ ხსნარში 3-4 ჯერ, სანამ ფონის ფერი არ გახდება ნათელი.შრატის ცილები უნდა იყოს ნაჩვენები ზოლებზე და ჩვეულებრივ არის ხუთი ზონა, რომლებიც ქმნიან ზედა ბოლოს მონიშნულ ხაზს, ალბუმინი, α1-გლულინი, α2-გლულინი, β-გლულინი, γ-გლულინი.

5) კონსერვაცია: ჩადეთ მშრალი ელექტროფორეზიბენდისაწმენდ ხსნარში 10-15 წუთის განმავლობაში, შემდეგ გამოიღეთ და დადეთ სუფთა მინაზე, გაშრობის შემდეგ გახდება გამჭვირვალე ფილმი.ბენდი.

Ექსპერიმენტიშედეგი

შრატის ნიმუშების გამოყოფის ეფექტი კარგია და არ არსებობს ზოლის კუდის ფენომენი.შედეგების განმეორებადობა განსხვავდება ტესტის პროცედურებისა და ექსპერიმენტატორის მეთოდების გამო, ხოლო განმეორებადობა მაღალია.

დასკვნა

სწრაფი კლინიკური ელექტროფორეზის გამოვლენის სისტემა (ელექტროფორეზის ავზიDYCP-38C,ენერგიის წყაროDYY-6C და უმაღლესი ნიმუშის ჩატვირთვა WD-9404) ჩვენი მიერ წარმოებულიკომპანია Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdაკმაყოფილებს ექსპერიმენტულ მოთხოვნებს,დაშედეგები რეპროდუცირებადია, მარტივი და სწრაფი, შესაფერისისწავლებაკვლევა.

პეკინი ლიუიBiotechnology Co., Ltd. სპეციალიზირებულია ელექტროფორეზის პროდუქტების წარმოებაში სიცოცხლის მეცნიერების ინდუსტრიისთვის, რომელიცაქვს 50 წელზე მეტი ისტორია ჩინეთში და კომპანიას შეუძლია უზრუნველყოს სტაბილური და მაღალი ხარისხის პროდუქცია მთელ მსოფლიოში.განვითარების წლების განმავლობაში, ის თქვენი არჩევანის ღირსია!

ჩვენ ახლა ვეძებთ პარტნიორებს, მივესალმებით როგორც OEM ელექტროფორეზის ავზს, ასევე დისტრიბუტორებს.

ჩვენს შესახებ დამატებითი ინფორმაციისთვის გთხოვთ დაგვიკავშირდეთ ელექტრონული ფოსტით[ელფოსტა დაცულია]ან[ელფოსტა დაცულია].